تولید سلول های ناپذیرا برای مطالعه hiv-۱ vif

سابقه و هدف: مولکول apobec3g ، به عنوان فاکتور سلولی دخیل در میانکنش با vif hiv-1 عمل می­کند که برای بررسی میانکنش آن با vif hiv-1 ، از سلول­های ناپذیرای طبیعی و ذاتی مثل h9 و pbmc انسانی مولد apobec3g استفاده می­شود. به دلیل ناکارآمدی آنها در این نوع بررسی­ها، نیازمند سلول­های ناپذیرایی بودیم که به طور ثابت و به میزان بالا تولید apobec3g بنماید. لذا از سلول­های 293t برای ایجاد این دسته از سلول­ها استفاده شد. مواد و روش­ها: از سلول­های 293t برای تولید سلول­های ناپذیرا ( non-permissive ) استفاده شد که این کار پس از ترانسفکشن با کلون­های مولکولی pcdna-apo3g صورت گرفت و سپس با روش وسترن بلاتینگ، میزان بیان آنها بررسی شد. همچنین فعالیت رپلیکاسیون hiv-1 با استفاده از rt assay و عفونت­زایی آنها به وسیله magi assay بررسی شد. نتایج: در این مطالعه، تعدادی رده سلولی 293t ابرازکننده یک فاکتور انسانی ضد hiv-1 به نام apobec3g تهیه شد. به آسانی از طریق ایمونوبلاتینگ اثبات شد که چهار کلون از هفت کلون مورد بررسی، apobec3g را ابراز می­کنند. به ویژه مشخص شد که دو کلون (a3g-c1,a3g-c4) تولید مقادیر بالاتری از apobec3g را در مقایسه با کلون­های سلولی pooled می­نماید. اثربخشی ترانسفکشن همه این کلون­ها مشابه سلول­های والد بود؛ با تولید سطح قابل قیاسی از ویریون­ها در نتیجه ترانسفکشن کلون­های dna ویروسی نوع وحشی و vif منفی ( - vif ). به علاوه سطح ابرازی apobec3g در بهترین رده سلولی (a3g-c1) ، بسیار بالاتر از سطح ابرازی در یک رده سلولی لنفوسیتی apobec3g مثبت و سلول­های تک­هسته­ای خون محیطی بود. در نهایت دخول apobec3g در ویریون­های تولید شده در a3g-c1 مونیتور و پیگیری شد. apobec3g به راحتی در ذرات ویروسی پروژنی در نتیجه ترانسفکشن کلون پروویروسی vif منفی، و نه در کلون نوع وحشی، تشخیص داده شد. نتیجه­گیری: این نتایج مشخص ساختند که رده سلولی جدید تولید شده برای مطالعات مختلف بررسی میانکنش apobec3g انسانی و hiv-1 vif مفید است.